大黄对慢性肾衰竭大鼠模型尿毒症毒素的影响

２０１７年７月第１３期　１１７　大黄对慢性肾衰竭大鼠模型尿毒症毒素的影响　戴铭卉　孔薇。　（１．南京市中医院南京　２１０００１；２．南京中医药大学第三附属医院南京２１０００１）　摘要：目的：探讨大黄对慢性肾衰竭模型大鼠代谢毒素的影响及优势。方法：将３２只Ｓ　Ｄ大鼠随机分为４组：空白对照纽，模型纽，腹膜透　析组，大黄组，各组按相应药物剂量灌胃，腹透；造模第８周末检测各组血清尿素、肌酐、尿酸、胱抑素ｃ含量，运用高效液相色谱一荧光检测法　检测血清硫酸吲哚酚含量。结果：与空白对照组相比，模型组血清尿素、肌酐、尿酸、胱抑素ｃ含量明显升高（Ｐ＜０．０５）；与模型组相比，大黄组各　项尿毒症毒素含量明显降低（Ｐ＜Ｏ．０５）；与腹透组相比，大黄组胱抑素ｃ、尿酸含量明显降低【Ｐ＜０．０５）；与模型组相比，大黄组硫酸吲哚酚含量明　显降低　＜０．Ｏ５）；与腹透组相比，大黄组硫酸吲哚酚含量明显降低　＜０．０５）。结论：大黄可清除尿毒症毒素，延缓肾损害进展，其原因可能与蛋　白结合型代谢毒素的清除有关。　关键词：泄浊法；慢性肾衰竭；尿毒症毒素　中图分类号：Ｒ２８５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６．０９７９（２０１７）１３—０ｌ１７—０３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｒｈｕｂａｒｂ　ｏｎ　ｕｒｅｍｉａ　ｔｏｘｉｎ　ｉｎ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ＤＡＩ　Ｍｉｎｇ－ｈｕｉ，ＫＵＮ　Ｗｅｉ　（Ｎａｎｊｉｎｇ　ｃｉｔｙ　ＴＣＭ　ｈｏｓｐｉｔａｌ　２１０００１）　ＩＡｂｓｔｒａｃｔｌＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄａｈｕａｎｇ　ｏｎ　ｕｒｅｍｉａ　ｔｏｘｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｋｉｄｎｅｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｒａｔｓ，ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｉｔｓ　Ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄ：３２　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎ　ｔｏ　ｂｌａｎｋ　ｇｒｏｕｐ，Ｄａｈｕａｎｇ　ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｄｉａｌｙｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ．Ａｌｌ　ｒａｔｓ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｋｉｄｎｅｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｂｙ　ａｄｅｎｉｎｅ（２００ｍｇ・ｋｇ－１ｅｄ　）４９　ｄａｙｓ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｌｙ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ　ｏｎｃｅ　ａ　ｄａｙ　ｅｘｃｅｐｔ　ｔｈｅ　ｂｌｎｋ　ａｇｒｏｕｐ．　Ａｆｔｅｒ　５６　ｄａｙｓ’￣ｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ　ｕｒｅａ　ｎｉｒｔｏｇｅｎ，ｅｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｃｙｓｔａｔｉｎ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎｄｏｘｙｌ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｉｎ　ｓｅＢ．１ｍ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ—ＭＳ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｕｒｅａ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ，ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ｕｒｉｃ　ａｃｉｄ，ｃｙｓｔａｔｉｎ　ａｎｄ　ｉｎｄｏｘｙｌ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｉｎ　ｓｅｒｕｌＴｌ　ｗｅｒｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｄａｈｕａｎｇ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅ　Ｄａｈｕａｎｇ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｔｅｒ　ｈａｔｎ　Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｄｉａｌｙｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｄａｈｕａｎｇ　ｍａｙ　Ｐｌａｙ　ａ　Ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｒｅｎａｌ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｂｙ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｔｏｆ　ｉｎｄｏｘｙｔ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ．　ＩＫｅｙ　ｗｏｒｄｓｌＤａｈｕａｎｇ；ｃｈｒｏｎｉｃ　ｋｉｄｎｅｙ　ｄｉｓｅａｓｅ；ｕｒｅｍｉａ　ｔｏｘｉｎ　慢性肾衰竭（ＣＲＦ）是多种因素引起的肾脏功能障碍或（和）结　服腺嘌呤，剂量２００　ｍｇ・ｋｇ＿。・ｄ＿。，至第４周结束。第４周末，每组随　构改变所导致的一系列ｌ临床综合征。近年来成为严重损害人类健康　机抽取２只大鼠，目内眦取血，检测肌酐、尿素水平，提示造模成功　】。　的慢性杀手　。慢性肾衰竭患者的肾功能不断减退，具有毒性的代谢　从第５周开始除了空白对照组，其余各组大鼠隔日上午灌服腺嘌呤，　　＿。・ｄ－。，至第７周结束。第８周开始各组均停止腺嘌　产物因无法排出被潴留在机体内，导致各种病理改变。这些代谢废　剂量２００　ｍｇ・　物通称为尿毒症毒素，主要分为４类：小分子毒素；中分子毒素；与蛋　呤灌服。整个实验过程所有大鼠进水及饮食均不受限制。白结合的小分子化合物；蛋白质等。这４类毒素的常见代表分别为：　尿素、肌酐；肽类；硫酸吲哚酚、胱抑素Ｃ；粒细胞抑制蛋白等。肾替　代是慢性肾衰竭的常用治疗手段，如血液透析，腹透透析等，均成本　较高，且对于蛋白结合型毒素清除率较低，易影响患者生活质量。传　统典籍中并无慢性肾衰竭病名的记载，临床症状散见于‘冰肿”、‘獾　实验开始后第１天根据分组分别给予相应药物干预，根据药理学　实验动物给药方法，均以成人剂量（７０ｋｇ・ｄ　）的６Ｉ３倍药量，即生大黄　颗粒剂（生大黄２．３ｌｇ・ｄ～，）。以上中药颗粒溶于８０毫升蒸馏水中制　成混悬液，予大黄组大鼠灌胃１０ｍｌ・只～・ｄ～，连续８周。腹透组大鼠　右下腹注入２．５％腹膜透析液，２０ｍＬ・只・ｄ～，连续８周　Ｊ。模型组大鼠　予蒸馏水１０ｍｌ・只　灌胃，每天１次，连续８周。　闭”、‘‘关格”等病证中。慢性肾衰竭最重要病机是浊毒内蕴，也是影　自实验开始的第１天，响预后的主要因素。大黄自孟和医派大家邹云翔教授成功用于抢救　对照组大鼠自实验开始的第１天，予蒸馏水１０ｍｌ・只　灌胃，每天两　尿毒症患者后，逐渐成为通腑泄浊法治疗ＣＲＦ的代表药物。本研究　次，至第４周末。自第５周开始，隔日上午予蒸馏水１０ｍｌ・只　灌胃，　通过观测大黄对各类型尿毒症毒素的影响差异，探索大黄治疗慢性　每天下午予蒸馏水１０ｍｌ・只　灌胃，至第７周末。第８周予每天下午　肾衰竭的作用靶点。　１　材料与方法　蒸馏水１０ｍｌ・只　灌胃。　１．２．２实验标本的收集及观测方法：第８周末采集标本，提前禁食、禁　水１２ｈ。０．３　ｍ１・１００　ｇ。１０％水合氯醛腹腔注射麻醉，随后予腹主动　１．１材料　Ｉ．１．１药物与试剂：中药颗粒剂生大黄（江阴天江药业有限公司）；２．５％　脉采血，保存于无肝素采血管中，静置２０　ｍｉｎ，３　０００　ｒ・ｍｉｎ　离心１０　腹膜透析液（广州百特医疗用品有限公司）；硫酸吲哚酚标准品（美国　ｍｉｎ后送检；采血结束后摘取肾脏，矢状面剖开，４％中性甲醛固定２４　Ｓｉｇｍａ公司）；腺嘌呤（美国ＡＭＲＥＳＣＯ公司）；甲醇（山东瑞星化工有限　ｈ，制作病理切片，ＨＥ染色备用。　公司）；乙腈（德国Ｍｅｒｃｋ公司）；三氟乙酸（济南瑞福化工有限公司）；　１．２．２．１生化检测：大鼠尿素、肌酐、尿酸、胱抑素ｃ委托南京中医药大　１．１．２主要仪器：Ｗａｔｅｒｓ５１５型高效液相色谱仪，配７１７型自动进样器、　学第三附属医院检验科检测。　２４７５型荧光检测器（美国ｗａｔｅｒｓ公司）；色谱柱：ＢＤＳ　ＨｙＰｅｒｓｉｌ　Ｃ１８色　１．２．２．２硫酸吲哚酚检测：采用高效液相色谱一荧光分析法。步骤如　谱柱（大连依利特）、ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ　ＡＬ一２０４电子分析天平（梅特　下：（１）标准品储存液的制备：甲醇溶解并定容硫酸吲哚酚钾盐对　勒仪器上海有限公司）　１．２方法　照品２３．７１　ｍｇ，配得硫酸吲哚酚浓度为８００　ｕｇ・ｍＬ　的贮备液，用乙　腈稀释成最终浓度分别为８０，４０，２０，１Ｏ，５，０．５，Ｏ．１　ｕｇ・ｍＬ　的贮备　１．２．１动物分组、模型复制与药物干预：清洁级雄性ＳＤ大鼠３２只，体　重（１８０±３０）ｇ，由南京中医药大学动物实验中心提供，动物许可证　号：ＳＣＸＫ（浙）２０１４—０００１。按照随机数字表随机分为对照组、模型组、大　黄组、腹透组。每组８只，于温度、湿度恒定的动物房中适应性饲养１周。　从实验第１天开始，除了空白对照组，其余各组大鼠每日上午灌　液备用。（２）色谱条件：①流动相：磷酸二氢钠缓冲液（０．１％三氟乙　酸，ＰＨ２．５）一乙腈（９２：８）；②流速：１．０　ｍＬ・ｍｉｎ～；③柱温：３０￣Ｃ；④样　品温度：６℃；⑤检测波长：　ｅｘ＝２８０　ｎｍ，　ｅｍ＝３９０　ｎｍ；ｆ　４）样品处　理方法：３　０００　ｒ／・ｍｉｎ　’１０　ｍｉｎ分离血清，一２０℃保存。小心吸取血清　１００　Ｌ于干净试管中，加入３００　Ｌ　０．２％三氟乙酸一乙腈（１０：９０）沉　１１８　淀蛋白，漩涡混匀３０ｓ后离心（１２０００　ｒ・ｍｉｎ～，８　ｍｉｎ，４￣Ｃ），吸取上层　清液２００　Ｌ，微孔滤膜滤过后进行分析。　１．２－３统计学方法：所有统计数据均采用ＳＰＳＳ２２．０统计软件进行分　３　内蒙古中医药　注：　：与模型组相比：Ｐ＜Ｏ．０５；　：与大黄组相比：Ｐ＜Ｏ．０５。　讨论　大黄是临床最常用的中药材之一，作为传统泻下类中药的代表，　析处理，计量资料用（　±ｓ）表示。组间比较采用单因素方差分析（　首见记载于《神农本草经》，具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀　ｏｎｅ—ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ），组间两两比较方差齐采用ＬＳＤ法，方差不齐采用　通经、利湿退黄之功效。现代药理研究发现，大黄能通过改变游离氨　Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ　Ｔ３法。　基酸在血浆中的含量，达到降低血氨及肝脏荷尔蒙生成的目的；机体　２　结果　氮质的再利用率也可因大黄增强谷氨酰胺合成酶的活性而提高；大　２．１实验大鼠一般情况：（１）空白对照组大鼠动作敏捷，无脱毛，体重　黄可下调残肾代谢率，保存肾单位，控制肌蛋白的分解，增加肌酐和　增长正常，尿量少，色淡黄，大便成形偏硬，饮水饮食正常，实验过程　尿素的排泄。实验显示，大黄组较模型组，硫酸吲哚酚含量有明显差　中死亡１只。（２）模型组大鼠渐出现精神萎靡，反应迟钝，活动迟缓，　皮毛无光泽，毛量偏少，食欲差，饮水量多，尿量多，大便稀，体重增长　缓慢。实验过程中死亡２只。（３）腹透组整体状况与模型组相比有改　善，实验过程死亡２只。（４）大黄组在毛色、精神状态、活动性、体重方　面较模型组明显改善。实验过程死亡２只。　２．２生化指标：与空白对照组相比，模型组血清尿素、肌酐、尿酸、胱抑　素Ｃ含量明显升高　＜Ｏ．０５）；与模型组相比，腹透组尿素、肌酐含量明　显降低　＜０．０５）；与模型组相比，大黄组尿素、肌酐、尿酸、胱抑素ｃ含　异，提示大黄可降低大鼠血清中硫酸吲哚酚含量。表明大黄对此类　蛋白结合型尿毒症毒素的清除具有一定优势。体现了标本并治的原　则，达到延缓肾损害进展的目的。　当前尿毒症毒素研究的难点与热点是蛋白结合型毒素，这类毒　素因为可与白蛋白紧密结合而使得常用的血液透析等治疗方法难以　加以清除，随着疾病的发展不断于机体内累积，造成一系列的临床症　状及多系统受累。硫酸吲哚酚属于吲哚类蛋白结合型毒素的代表之　一。机体摄人的食物中含有色氨酸，这类氨基酸是硫酸吲哚酚的来　量明显降低　＜０．０５）；与腹透组相比，大黄组胱抑素Ｃ、尿酸含量明显　源。肠道与肝脏是机体合成硫酸吲哚酚最主要的两个脏器。吲哚酚　降低　＜Ｏ．０５）。（见表１）。　是色氨酸侧链被大肠埃希菌在结肠中氧化后的产物。结肠把大量此　表ｌ大黄对慢性肾衰竭大鼠尿素、肌酐、尿酸及胱抑素Ｃ的影响雠＝６　±ｓ）　类氧化产物重新吸收，进入肝脏，硫酸盐酯化吲哚酚后生成硫酸吲哚　９　ＩＪ，ｍｏｌ／Ｌ。肾脏是　组别　尿素／ｅｔｒｏｏ１．Ｌ－　肌酐＾１吣ｌＪＬ『‘　尿酎ｕｍｏ１．Ｌ－　胱抑素Ｃ／ｒａｇ・Ｌ－　酚。健康人群血清硫酸吲哚酚浓度通常不大于１．硫酸吲哚酚最主要的排泄器官。模型组大鼠。肾脏病理示严重。肾脏间　空白组　５．６７±０．５６　２９．８３．００±１．９４　１０４．３３±２０．１６　０．４４±０．２７　模型组５０．２２±７．８５㈤　２１　１，００士４１．７２（　㈣１７３．５０　４－５０．５９￣　帖　１．９８±０．２７￣　【３　质纤维化。根据近期研究结论，慢性肾衰竭的进展速度，肾脏功能的　损伤程度，均与肾间质纤维化正相关。肾小管上皮细胞中得细胞因　大黄组３１．１４－ｔ－３．３７‘　旺　１２７．６７－Ｉ－１９．３３‘　１０７．３３土１０．９９‘　（　１．３７±０．１０｛　子基因表达上调，促进转化生长因子，单核细胞趋化和激活因子诱导　腹透组　２５．４３±３．９２㈤　１３７．５０±３１．４‘０　１５０．５０±４．９７‘　１．３６±０．６０￣　注：　：与空白组相比，Ｐ＜０．０５；　：与模型组相比：Ｐ＜０．０５；”：与大　肾小管上皮细胞产生转化，细胞外基质沉积增多。硫酸吲哚酚正是　通过活化肾脏局部多种炎症细胞浸润，从而达到加速间质纤维化的　黄组相比：Ｐ＜０．０５；“　与腹透组相比：Ｐ＜０．０５　肾毒性作用　】。此外，硫酸吲哚酚亦能遏制促红细胞生成素的生成，　２．３硫酸吲哚酚测定：与模型组相比，大黄组硫酸吲哚酚含量明显降低　加重肾性贫血。慢性肾衰竭患者致死的首要并发症是心血管意外。　（Ｐ　ｎＯ５）；与腹透组相比＇大黄硫酸吲哚酚含量明显降低（Ｐ　ｏ５）（见表２）。　多数蛋白结合型尿毒症毒素同时具有心血管毒性，其中便包括硫酸　表２大黄对慢性肾衰竭大鼠硫酸吲哚酚的影响（ｎ－－６５￣ｓ－１　吲哚酚　】。其诱使全身氧化应激反应是机体动脉硬化的中心环节口】。　组别　Ｉｓ　模型组　４４．１６±１６．４２　ｌ４．７４±１．８９（　大黄组　腹透组　严重影响慢性肾衰竭患者的远期预后。泄浊类中药，因具有导泻、吸　附［８】、活血、排毒等功效而被经常用于慢性肾衰竭的中医临床治疗中。　大黄作为其中应用最为广泛的一味中药，除具上述作用外，更因其富　含多糖等数种益肾成分　】，成为治疗慢性肾衰竭的要药及研究热点。　然而，中医药改善肾脏功能的机制长久以来缺乏系统深入的研究，多　３７．２８±１Ｏ．０３（　注：“：与模型组相比，Ｐ＜０．０５；１２：与大黄组比较：Ｐ＜０．０５。　２．４肾脏病理　２．４．１肉眼观察：空白组大鼠肾脏蚕豆大小，暗红色，质韧光滑。其余　组大鼠肾脏明显肥大，色白，粗糙不平。　２．４．２光镜观察：光镜下空白组大鼠未见硬化肾小球；其余各组大鼠　肾脏产生腺嘌呤异物肉芽肿，大量炎症细胞浸润，肾间质纤维化，肾　小管囊性扩张，毛细血管数量减少，大量管腔闭塞，系膜增生明显，以　上变化符合腺嘌呤模型大鼠肾脏病理变化　。模型组大鼠肾脏病理　改变最明显。　从治疗经验以及药物性味推导而来。实验结果显示大黄在降低慢性　肾衰竭大鼠血清肌酐水平方面与腹膜透析无明显差异，但对于降低　硫酸吲哚酚的作用却优于腹膜透析，提示对于蛋白结合类毒素的有　效清除可能是大黄延缓肾损害的原因。可能与以下机制相关：１大黄　可改善消化道微循环，增加局部血流灌注，提高血浆渗透压，降低毛　细血管通透性，降低肠道缺血性损伤的发生率。２抗自由基，防止多脏　器功能衰竭。３大剂量大黄作用于胃肠黏膜引起强烈的人工炎症，导　致肠黏膜上皮细胞大量增生，绒毛融合，大量炎细胞浸润，肠腔内粘　２．４．２肾小管间质纤维化指数：ＴＩＦＩ根据纤维化程度分为四级（０—３　液的分泌功能增强，在胃肠黏膜表面形成保护膜促进肠黏膜杯状细　级）。具体评分方法如下（２０倍目镜下）ｔ　１０级，表示无明显小管间质　胞的增生ｏ［１ｏ１４大黄能够抑制大肠杆菌等肠道条件致病菌和肠球菌等　病变；２１级，表示病变程度小于２５％；３２级，即灶状损伤，病变程度　有害菌，显著降低体内内毒素水平。大黄作为清热泻下的代表药物，　２５　７５％；４３级，即多灶状损伤，代表病变程度大于７５％。分值由低到　可刺激肠蠕动，增强胃肠道运动功能”“。　高，提示肾小管间质纤维化由轻到重。以上分析均由未知分组的南　实验以腹膜透析作为对照组。腹膜透析是终末期肾脏病患者肾替　京中医药大学第三附属医院病理科完成。　代治疗常用治疗手段，具有易于操作，对血流动力学影响较小的优势，对　ＴＩＦＩ＝［（１×ｘｌ＋２×Ｘ２＋３×Ｘ，）／１０］（Ｘ表示病变肾小管间质视野数）　表３　大黄对慢性肾衰竭大鼠ＴＩＦＩ的影响　组别模型组　大黄组　腹透组　蛋白结合类毒素具有一定的清除效果．毒素代谢的方式是可能原因　。　４　结论　±ｓ）　ＴＩＦＩ　２５３３±１＿２１　大黄可以降低慢性肾衰竭大鼠尿毒症毒素水平，尤其在硫酸吲　哚酚的清除方面具有一定优势。为中药清除蛋白结合型毒素提供了　新的思路。　参考文献　１５．５Ｏ±０．８４｛　ｌ８．００±０．６３｛　（　２０１７年７月第１３期　ｆ１１赖玮婧，刘芳，付平．慢性肾衰竭评估及管理临床实践指南解读一从　Ｋ／ＤＯＱＩ到ＫＤＩＧＯ［Ｊ］．中国实用内科杂志，２０１３，３３（６）：４４８—４５０．　ｌ１９　ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ　ＩＩ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｕＰｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅＰｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｅｘＰｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ．Ｌｉｆｅ　『２１ＺＡＥＲＩＥ　Ｍ，Ｄｅ　ＶＲＩＥＳＥ　ＡＳ，ＨＥＫＫＩＮＧ　ＬＨ，ｅ’ｔａ１．Ｉｍｍｕｎｏ—　ｓｃｉｅｎｃｅｓｏ］．２０１２，４；９１（５—６）：１７２．　８】彭涛，胡昭．中药灌肠在慢性肾衰竭中的治疗作用ＵＪ．江西医药，　Ｐａｔｈｏｌｏｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ａ　ｕｒａｅｍｉｃ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｄｉａｌ—ｙｓ　ｌＳＯ１．　【ＮｅＰｈｒｏｌ　Ｄｉａｌ　ＴｒａｎｓＰｌａｎｔ，２００５，２０（７）：１３５０－１３６１．　２００５，４０（３）：１３０—１３１．　『３１郭小云，夏天．ＶＥＧＦ在腹膜透析模型大鼠中的表达及意义．河北　【９】林茵绿，杜顺福，蔡元坤大黄对重症急性胰腺炎大鼠肠道屏障功能　北方学院学报（医学版），２０１０，２７（４）：９—１１．　型Ⅱ１．中华肾脏病杂志，１９８９，５（６）：３４２—３４４．　ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｉｎｔｒａｒｅｎａｌ　ｒｅｎｉｎ——ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ——ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅｓｙｓｔｅｍ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　保护的实验研究Ｕ］．河北中医，２００２，２４（１１）８７５—８７８　２００８，２２（３）：５８７—５８９．　１Ｏ】王娴．中药灌肠治疗慢性肾功能衰竭的研究进展Ｕ】．护理研究，　【４】郑平东，朱燕俐，丁名城，等．用腺嘌呤制作慢性肾功能衰竭动物模　【１１】国家中医药管理局中华本草编委会．中华本草【Ｍ】．上海：上海科　［５］Ｓｕｎ　ＣＹ，Ｃｈａｎｇ　ＳＣ，Ｗｕ　ＭＳ．Ｕｒｅｍｉｃ　ｔｏｘｉｎｓ　ｉｎｄｕｃｅ　ｋｉｄｎｅｙｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｂｙ　［学技术出版社，２００９．　【１２］Ｐｈａｍ　ＮＭ，Ｒｅｃｈｔ　ＮＳ，Ｈｏｓｔｅｔｔｅｒ　ＴＨ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｍｏｖａ１．ｏｆｔｈｅＰｒｏｔｅｉｎ　——ｅＰｉｔｈｅｌｉａｌ—ｔＯ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｔｒａｎｓｉｉｔｏｎⅡ】．Ｐｌｏ　Ｓ　ｏｎｅ，２０１２，７（３）：ｅ３４０２６　［６］Ｊｏｕｒｄｅ—Ｃｈｉｃｈｅ　Ｎ，Ｄｏｕ　Ｌ，Ｃｅｒｉｎｉ　Ｃ．Ｐｒｏｔｅｉｎ—ｂｏｕｎｄ　ｔｏｘｉｎｓ—ｕＰｄａｔｅ　２００９Ｕ］．Ｓｅｍｉｎａｒｓ　ｉｎ　ｄｉａｌｙｓ　ＩＳ　２００９，２２（４）：３３４．　『７１Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｈ，Ｈｉｒｏｓｅ　Ｙ，Ｇｏｔｏ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｏｘｙｌ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｅｎ－－ｈａｎｃｅｓ　ｂｏｕｎｄ　ｓｏｌｕｔｅｓ　ｉｎｄｉｃａｎ　ａｎｄ　Ｐ——ｃｒｅｓｏｌ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｂｙ　ＰｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉｌｙｓａｉｓＵ］．　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＳｏｃｉｅＷ　ｏｆ　ＮｅＰｈｒｏｌｏ—ｇＹ，２００８，３（１）：８５．　２０１７年６Ｂ　２４日收稿　清热解毒、活血通络法治疗创伤性骨髓炎的实验研究　滕加文　梁学振　李梁　（１．山东中医药大学附属医院显微骨科山东　２５００１４；２．山东中医药大学山东２５０３５５）　摘要：目的：探讨通过清热解毒、活血通络法治疗创伤性骨髓炎。方法：普通级别成年新西兰大白兔３Ｏ只，性别不限，体质量２．０ｋｇ～２．５ｋ　ｇ，　采用直接胫骨骨髓腔注入金黄色葡萄球菌菌种制备骨髓炎动物模型。制备成功并行清创手术后，以术后是否灌注中药制剂分为中药组１５只　与对照组１５只。并于术前及术后７ｄ、１４ｄ、２８ｄ、５６ｄ分别观察和测量其大体情况，体温、体重、白细胞计数及影像学结果及病理检测结果，统计　有效率并行统计分析。结果：经实验研究发现，中药组实验兔术后患侧皮肤红肿减轻，运动功能恢复良好，窦道愈合明显。中药组在术后７ｄ、　１４ｄ、２８ｄ及５６ｄ在体温、白细胞计数较对照组明显降低，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），体重变化也较对照组稳定，影像学检测结果中，中药组较对　照组骨髓炎Ｎｏｒｄｅｎ评分明显降低（ｐ＜０．０５），且病理实验也显示中药组炎性浸润较对照组减少。通过中药制剂治疗兔创伤性骨髓炎的有效率　为９３．３３％。结论：通过实验研究证明，清热解毒、活血通络法对于创伤性骨髓炎具有明显的疗效，这为创伤性骨髓炎的治疗提供了新的思路　与方法，并为以后相关疾病的探索，诊断，治疗提供参考。　关键词：清热解毒；活血通络；骨髓炎；中药制剂　中图分类号：Ｒ２８５５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６．０９７９（２０１７）１３．０１１９—０３　骨髓炎是骨科临床上较为常见的难治性疾病，是一种伴随着　养基中，３５℃重新培养，次日待肉汤混浊后取一环分区画线于血平　骨质破坏和进行性炎症的感染状态。有报道显示，在开放性骨折　板上，并于３５℃重新培养，次日取单菌落用ＰＢＳ调细菌浓度分别至　后的３个月内，发生严重感染的几率高达２７％【Ｊ　Ｊ，针对骨髓炎的　３×１０　ＣＦＵ／ｍｌ。配制好后立即使用。【６　治疗现多以控制感染，清创手术，置人抗生素人工骨和中西医结　中药制剂配制：金银花１５ｇ、蒲公英１５ｇ、紫花地丁１５ｇ、防己９　丹参９ｇ、当归１５ｇ、川芎９ｇ、牛膝９ｇ、大黄３ｇ、牡丹皮９ｇ、黄芪　合疗法等为主　，但却没有找到一个稳定而有效的切实办法来根　赤芍９ｇ、治。祖国医学很早就有对于骨髓炎的记载，其中创伤引起局部瘀　３０ｇ。上方清水浸泡３０ｍｉｎｓ后分两次熬煮，首次３０ｒａｉｎｓ，二次２０ｍｉｎｓ，　血，瘀久化热，导致经络闭阻，瘀血凝滞筋骨，致筋腐骨蚀的描述　取两次熬制液各１５０ｍｌ混合后放凉取用。每日即用即制。　又贴合创伤性骨髓炎发病机理ｌ５】，因此，本实验研究采用清热解　２　方法　毒、活血通络法治疗创伤性骨髓炎，以期为骨髓炎治疗探索新的　２．１造模方法：适应性饲养１周的新西兰大白兔，称重后以水合氯醛　思路与方法。　ｌ　材料与仪器　（３００ｍｇ／ｋｇ）腹腔麻醉，待麻醉成功后，固定于兔手术台上。　于右侧胫骨上端内侧剪毛备皮，碘伏溶液消毒，行右胫骨髌下　１．１实验动物：普通级别成年新西兰大白兔３０只，性别不限，体质量　内侧纵行切口，长约ｌｅｍ，分离软组织后显露胫骨干垢端，用ｌｍｍ克　２．Ｏｋｇ一２．５ｋ　ｇ，中位数２．３５ｋｇ，由济南西岭角养殖繁育中心单位提供，　氏钻头钻人髓腔，从钻孔处抽出０．５ｍｌ骨髓，后注入５％鱼肝油酸钠　实验动物许可证号：ＳＣＸＫ（鲁）２０１５０００１。　０．３ｍｌ，静置５分钟后，注入制备好的金黄色葡萄球菌菌液Ｏ．１ｍｌ，骨蜡　１．２实验药物及试剂：见表１。　封闭钻孔，以防止菌液溢出，冲洗后逐层缝合。　表ｌ实验药物及试剂　水合氯醛　ＭＨ培养基　５％鱼肝油酸钠针剂（２ｍｌ／支）　术后动物隔离分笼饲养，患肢不制动，标准进食，不应用任何抗　天津盛鑫源化工有限公司　山东中医药大学附属医院细菌室　生素及其他药物，术后７ｄ内隔日用碘伏溶液消毒伤口。２８ｄ后３Ｏ只兔　均造摸成功。　２．２干预方法　上海信宜金朱药业有限公司　东莞市健威医疗器械有限公司　山东中医药大学附属医院手术　３×１０７ＣＦＵ／ｒｒｄ金黄色葡萄球菌株　山东中医药大学附属医院细菌室　兽用血细胞分析仪　外科手术器械　动物用体温计　通讯作者　２．２．１手术方法：取骨髓炎模型实验兔３０只，于右胫骨骨髓炎处行蝶形　清创手术，术后以随机数法将实验兔分为对照组１５只及中药组ｌ５只。　２．２．２分组方法：对照组术后正常进食，每日喂食２０ｍｌ生理盐水；中药　郑州英联机械设备有限公司　菌液配制：取甘油保存的金黄色葡萄球菌标准菌株至肉汤培　组术后正常进食，每日喂食中药２Ｏ　ｍ１。各组２８ｄ后处死７只行病理　检验，５６ｄ后处死剩余全部行病理检验。术前两组体温、体重、白细胞　计数及骨髓炎Ｎｏｒｄｅｎ评分无明显差异：表ｌ。